色谱（chromatography）是分析测试物质理化性质的常用的有效手段，多用于生物分子及高聚物的分离检测等。
分析色谱与制备色谱的区别
1、分析色谱、制备色谱的设备基础是什么？
分析色谱、制备色谱的共同的鼻祖是高效液相色谱(High Pe-rformance Liauid Chromatography，HPLC)，高效液相色谱的优点是：(1)、分辩率高于其它色谱法；(2)、速度快，十几分钟到几十分钟内可完成；(3)、实验重复性高；(4)、高效相色谱柱可反复使用；(5)、自动化操作，分析精确度高。
根据用途不一样，逐渐区分出来：分析型用来做样品定性，纯度检测的，即为分析色谱；制备型是用来快速分离和纯化产品的，即为制备色谱。
2、分离纯化量上，如何区别，分析色谱与制备色谱？
满足常规仪器分析，所需要的纯样品的量：(1)、NMR：1-10 mg；FT-IR：0.1-1 mg；IR：1 mg；UV-Vis：＜ 1 mg；元素分析：1-10 mg；MS：0.01-1 mg；全面鉴定一样品结构：10-50 mg。
分析色谱：要求分离度高、速度快，分离的容量自然而然就要降低，获得样品的量很少，一般依次可以得到1mg样品；制备色谱，制备富集是目的，要求高容量，分离度和速度自然就会降低，获得样品可以是分析色谱的几倍、几百倍以及上千倍，一般简单一次得到的样品量不少于100mg。
NO 3：分析色谱与制备色谱的区别点
4、分析色谱与制备色谱的关系如何？
分析色谱是制备色谱的基础。当我们在分析色谱上取得了良好的分离效果时，可以将其放大，应用到制备色谱上。将分析色谱的进样量增大，同时得出大量的所需物质（馏分）的过程就可以称为制备色谱。分析色谱的目的，是分析出混合物中一个（或者几个）纯物质的含量。制备色谱的目的，是从混合物中得到纯物质。为了加快分离的时间与提高分离的效率，制备色谱的的进样品量很大，导致制备色谱柱子的分离负荷的相应加大，也就必须加大色谱柱填料，增大制备色谱的直径和长度，使用的相对多的流动相。
5、制备色谱能当分析色谱用吗？
制备色谱与分析色谱差别较大在于精度。制备色谱为了获得分离物质的纯度和量，适当的放弃了对于精度的苛求。制备色谱当做分析色谱用，应该针对具体的样品情况而定。样品较易分离时，制备色谱还是可以当分析色谱使用。
分析色谱：在乎分析结果,对化验结果的纯度,比例等要求准确，而对收率，浓度等产品参数不在乎，一次进料，而且每次进料少；制备色谱：比较在乎高效能得到纯化物质。
色谱工作原理
色谱包含多种操作方式不同但原理相同的分离、分析技术。按其流动相和固定相状态不同分为气相色谱和液相色谱。今天，随测了么小编来看一下色谱仪具体是怎么工作的吧！
气相色谱仪流程
你一般看到的气相色谱仪是长这样的。
色谱仪
以气相色谱仪为例，主要由三大部分构成：载气、色谱柱、检测器。每一模块具体工作流程如下。
注射器
色谱柱
色谱柱分类
1、非极性
100%Dimethylpolysiloxane，100%聚二甲基硅氧烷
产品牌号：AC1，OV-101，OV-1，DB-1，SE-30，HP-1，RTX-1，BP-1
2、弱极性
5%Phenyl dimethylpolysiloxane, 5%二苯基(95%)二甲基聚硅氧烷
产品牌号：AC5，SE-52，
5% Phenyl 1%vinyldimethyl polysiloxane，5%二苯基1%乙烯基(94%)二甲基聚硅氧烷
产品牌号：OV-5，DB-5，SE-54，HP-5，RTX-5，BP-5
3、 中等极性
50%Phenyl dimethylpolysiloxane, 50%二苯基(50%)二甲基聚硅氧烷
产品牌号：OV-17，HP-50，RTX-50
14%Cyanopropylphenyl polysiloxane, 14%氰丙基苯基(其中7%氰丙基7%苯基)(86%)二甲基聚硅氧烷
产品牌号：AC10，OV-1701，DB-1701，RTX-1701
50% Cyanopropylphenyl polysiloxane，50%氰丙基苯基(其中25%氰丙基25%苯基)(50%)二甲基聚硅氧烷
产品牌号：AC225，OV-225，BP-225，DB-225，HP-225，RTX-225
4、强极性
polyethylene glycol,聚乙二醇
产品牌号：AC20，PEG20M，HP-INNOWAX
氢焰检测器
Size exclusion chromatography（SEC）
体积排阻色谱法（SEC）是利用多孔凝胶固定相的独特特性，主要依据分子尺寸大小的差异来进行分离的方法，样品分子与固定相之间不存在相互作用。
根据所用凝胶的性质，可以分为使用水溶液的凝胶过滤色谱法（GFC）和使用有机溶剂的凝胶渗透色谱法（GPC）。
只依据尺寸大小分离，大组分最先被洗提出
原理：色谱固定相是多孔性凝胶，只有直径小于孔径的组分可以进入凝胶孔道。大组分不能进入凝胶孔洞而被排阻，只能沿着凝胶粒子之间的空隙通过，因而最大的组分最先被洗提出来。
直径小于孔径的组分进入凝胶孔道
小组分可进入大部分凝胶孔洞，在色谱柱中滞留时间长，会更慢被洗提出来。溶剂分子因体积最小，可进入所有凝胶孔洞，因而是最后从色谱柱中洗提出。这也是与其他色谱法最大的不同。
依据尺寸差异，样品组分分离
体积排阻色谱法适用于对未知样品的探索分离。凝胶过滤色谱适于分析水溶液中的多肽、蛋白质、生物酶等生物分子；凝胶渗透色谱主要用于高聚物（如聚乙烯、聚丙烯、聚苯乙烯、聚氯乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯）的分子量测定。
Ion exchange Chromatography(IEC)
离子交换色谱是利用被分离组分与固定相之间发生离子交换的能力差异来实现组分分离。
离子交换色谱主要用于分离离子或可离解的化合物。
原理：固定相为离子交换树脂，树脂分子结构中存在许多可以电离的活性中心。流动相最常使用水缓冲溶液，也有有机溶剂如甲醇，或乙醇同水混合。
初始平衡状态
流动相带着样品组分电离生成的离子通过固定相时，待分离组分中的离子与树脂分子结构中可电离的活性中心发生离子交换，形成离子交换平衡，从而在流动相与固定相之间形成分配。
样品组分与活性中心发生离子交换
固定相的固有离子与待分离组分中的离子之间相互争夺固定相中的离子交换中心，并随着流动相的运动而运动，最终实现分离。
洗提过程
洗提过程
Affinity Chromatography(AFC)
亲和色谱法是利用与固定相不同程度的可逆结合的亲和性，使成分与杂质分离的色谱法。固定相为相互间具有高度特异亲和性的二种物质之一。
初始平衡状态
亲和吸附
不同分子与固定相间亲和力大小有差异，选择适当的洗脱条件便可将混合物中的组分逐个洗脱下来，达到分离纯化的目的。
解吸附
主要用于分离活体高分子物质、过滤性病毒及细胞。优点是操作简便、效率高、条件温和，缺点是使用局限性大。
Hydrophpbicinteraction Chromatography(HIC)
色谱仪的选用依据：
1. 相对分子质量:
相对分子质量小于200、挥发性比较好的化合物，可用气相色谱仪剖析。
相对分子质量在200～2000的化合物，可用液-液分配色谱仪、液-固吸附色谱仪和离子交换色谱仪剖析。
相对分子质量大于2000的化合物，可用凝胶色谱仪剖析。
2. 溶解性
水溶性样品选用离子交换色谱仪和液-液分配色谱仪剖析。
微溶于水，但用酸或碱能很好电离的化合物，可用离子交换色谱仪剖析。
油溶性和非极性的样品，可选用液固吸附色谱仪。
3. 化学构造
含有离子型或可离子化的化合物，或者能与离子型化合物相互作用的化合物（如配位体和有机螯合剂），可首要考虑用离子交换色谱仪，或液-液分配色谱仪和凝胶色谱仪。
具有不同官能团的化合物、同系物，可用液-液分配色谱仪剖析。
异构体可用液固吸附色谱仪剖析。
高分子聚合物可用凝胶色谱仪。
高效液相色谱分析法和气相色谱法的区别
高效液相色谱分析法和气相色谱法的区别：
1、概念区分：
气相色谱：气相色谱是一种物理的分离方法。利用被测物质各组分在不同两相间分配系数(溶解度)的微小差异，当两相作相对运动时，这些物质在两相间进行反复多次的分配使原来只有微小的性质差异产生很大的效果而使不同组分得到分离。
液相色谱：高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上引用了气相色谱的理论。在技术上，流动相改为高压输送；色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱(每米塔板数可达几万或几十万)；同时，柱后连有高灵敏度的检测器可对流出物进行连续检测。
2、应用范围区分：
气相色谱：分离能力好、灵敏度高、分析速度快、操作方便等。
受技术条件的限制，沸点太高的物质或热稳定性差的物质都难于应用气相色谱法进行分析，一般对500℃以下不易挥发或受热易分解的物质部分可采用衍生化法或裂解法。
液相色谱：高效液相色谱法只要求试样能制成溶液，而不需要气化，因此，不受试样挥发性的限制。对于高沸点、热稳定性差、相对分子量大(大于400以上)的有机物(些物质几乎占有机物总数的75%~80%)原则上都可应用高效液相色谱法来进行分离、分析。据统计，在已知化合物中能用气相色谱分析的约占20%而能用液相色谱分析的约占70~80%。
3、仪器构造区分
1、气相色谱：
由载气源、进样部分、色谱柱、柱温箱、检测器和数据处理系统组成。进样部分、色谱柱和检测器的温度均在控制状态。
1.柱箱:
色谱柱是气相色谱仪的心脏，样品中的各个组份在色谱柱中经过反复多次分配后得到分离从而达到分析的目的，柱箱的作用就是安装色谱柱。由于色谱柱的两端分别连接进样器和检测器，因此，进样器和检测器的下端(接头)均插入柱箱。柱箱能够安装各种填充柱和毛细管柱，并且操作方便。色谱柱(样品)需要在一定的温度条件下工作，因此，采用微机对柱箱进行温度控制。并且由于设计合理，柱箱内的梯度很小。
对于一些成份复杂、沸程较宽的样品，柱箱还可进行三阶程序升温控制。且程序设定后自动运行无需人工干预，降温时还能自动后开门排热。
2.进样器:
进样器的作用是将样品送入色谱柱。如果是液体样品，进样器还必须将其汽化。因此，采用微机对进样器进行温度控制。
根据不同种类的色谱柱及不同的进样方式，共有五种进样器可供选择:
填充柱进样器
毛细管不分流进样器附件；
毛细管分流进样器附件；
毛细管分流/不分流进样器；
六通阀气体进样器；
3.检测器:
检测器的作用是将样品的化学信号转化为物理信号(电信号)。
检测器也需要在一定的温度条件下才能正常工作，因此，采用微机对检测器进行温度控制。
根据各种样品的化学物理特性，共有五种检测器可供选择:
氢火焰离子化检测器(FID)
热导检测器(TCD)
电子捕获检测器(ECD)
氮磷检测器(NPD)
火焰光度检测器(FPD)
4.数据处理系统：
该系统可对测试数据进行采集、贮存、显示、打印和处理等操作，使样品的分离、制备或鉴定工作能正确开展。
2、液相色谱
高效液相色谱仪主要有进样系统、输液系统、分离系统、检测系统和数据处理系统组成。
1.进样系统
一般采用隔膜注射进样器或高压进样间完成进样操作进样量是恒定的。
这对提高分析样品的重复性是有益的。
2.输液系统
该系统包括高压泵、流动相贮存器和梯度仪三部分。高压泵的一般压强为l.47~4.4X107Pa流速可调且稳定，当高压流动相通过层析柱时，可降低样品在柱中的扩散效应，可加快其在柱中的移动速度，这对提高分辨率、回收样品、保持样品的生物活性等都是有利的。流动相贮存错和梯度仪，可使流动相随固定相和样品的性质而改变包括改变洗脱液的极性、离子强度、pH值或改用
3.分离系统
该系统包括：色谱柱、连接管和恒温器等。
色谱柱一般长度为10~50cm(需要两根连用时，可在二者之间加一连接管)内径为2~5mm，由优质不锈钢或厚壁玻璃管或钛合金等材料制成，柱内装有直径为5~10μm粒度的固定相(由基质和固定液构成)，固定相中的基质是由机械强度高的树脂或硅胶构成，它们都有惰性(如，硅胶表面的硅酸基因基本已除去)、多孔性和比表面积大的特点，加之其表面经过机械涂渍(与气相色谱中固定相的制备一样)或者用化学法偶联各种基因(如，磷酸基、季胺基、羟甲基、苯基、氨基或各种长度碳链的烷基等)或配体的有机化合物。
因此，这类固定相对结构不同的物质有良好的选择性，例如，在多孔性硅胶表面偶联豌豆凝集素(PSA)后，就可以把成纤维细胞中的一种糖蛋白分离出来。
另外，固定相基质粒小，柱床极易达到均匀、致密状态，极易降低涡流扩散效应。基质粒度小、微孔浅，样品在微孔区内传质短。这些对缩小谱带宽度、提高分辨率是有益的。根据柱效理论分析，基质粒度小，塔板理论数N就越大。
这也进一步证明基质粒度小，会提高分辨率的道理。再者，高效液相色谱的恒温器可使温度从室温调到60℃通过改善传质速度，缩短分析时间，就可增加层析柱的效率。
4.检测系统
高效液相色谱常用的检测器有紫外检测器、示差折光检测器和荧光检测器三种：
(1)、紫外检测器
该检测器适用于对紫外光(或可见光)有吸收性能样品的检测。
其特点:使用面广(如，蛋白质、核酸、氨基酸、核苷酸、多肽、激素等均可使用)；灵敏度高(检测下限为10-10g/mL)；线性范围宽;对温度和流速变化不敏感；可检测梯度溶液洗脱的样品。
(2)、示差折光检测器
凡具有与流动相折光率不同的样品组分，均可使用示差折光检测器检测。糖类化合物的检测使用此检测系统。这一系统通用性强、操作简单，但灵敏度低(检测下限为10-7g/mL)流动相的变化会引起折光率的变化。因此，它既不适用于痕量分析，也不适用于梯度洗脱样品的检测。
(3)、荧光检测器
凡具有荧光的物质，在一定条件下，其发射光的荧光强度与物质的浓度成正比。因此，这一检测器只适用于具有荧光的有机化合物(如，多环芳烃、氨基酸、胺类、维生素和某些蛋白质等)的测定，其灵敏度很高(检测下限为10-12~10-14g/mL）痕量分析和梯度洗脱作品的检测均可采用。
5.数据处理系统
该系统可对测试数据进行采集、贮存、显示、打印和处理等操作，使样品的分离、制备或鉴定工作能正确开展。
声明：本站部分 章内容系出于传递信息之目的源自于第三方 站转载，行业企业、终端用户投稿。若对稿件内容有任何疑问或质疑，请立即与本 站联系，本 站将迅速给予回应并第一时间做出处理（联系邮箱：jinwei@zod.com.cn）。