新鲜未固定组织的冷冻切片
组织作冷冻切片最好新鲜，标本尽可能快速冷冻可以避免产生冷冻的人为改变。合适的冷冻技术所使用的冷冻剂包括：液氮( - 190 ℃) ；异戊烷(在液氮中冷却可达- 150 ℃) ；干冰( - 70 ℃)；二氧化碳气体( - 70 ℃) ；气雾状喷雾制冷剂( - 50 ℃) 。
最好的冷冻切片往往是从冷冻较快的组织获得，冷冻剂的最佳选择是异戊烷和液氮。使用液氮的问题在于组织周围易产生空泡，类似绝缘物一样，阻止快速均匀冷却组织，导致组织冷冻人为改变，给病理医师的诊断带来困难，这一点对肌肉活检标本来说特别明显。
液氮和异戊烷可以联合使用，速冻的方法是：在保温瓶中准备液氮约200 ml，在小烧杯中准备异戊烷约50 ml，将盛有异戊烷的烧杯置于液氮中，预冷至无气雾。注意两种物质不能相混。准备一个导热性能好的金属底托预冷，放少量 OCT，置于- 20 ℃低温恒冷箱切片机内，待底托上的 OCT 开始冻结时，将取好的组织块放置于上。用长镊子夹住底托，组织朝上，迅速浸入异戊烷中，速冻20～30s，即可取出。可以在室温中稍许放置1 min左右，待组织标本升温至- 20 ℃，便可开始切片。为防止组织破裂，减少冷冻的人为改变，可以事先将组织在滑石粉上轻轻碾平。
固体二氧化碳简称干冰，也可用来冷冻组织块。这一方法并不经济，因为干冰在储备阶段容易化为气体。操作时须戴上手套取出干冰，对着冷冻夹头上用包埋剂(如 OCT)包埋的组织，待组织周围的包埋剂发白时，即可移去干冰，防止组织冷冻过头而影响切片。关于二氧化碳收集，用一个二氧化碳汽缸储备即可获得，通过调节一个常规的冷冻切片机，其组织夹头带有气体或二氧化碳的循环箱，达到组织块冷冻的目的。
气雾状喷雾制冷剂在冷冻小块组织比较常用。提供该类制冷剂的厂家较多，产品便于储藏，易于购得。主要的问题在于因该制冷剂含有化学成分，故在释放降解的时候有可能会引起环境保护方面的问题。比如，技术人员在切片时喷雾操作不当而不小心被动吸入制冷剂。
固定组织的冷冻切片
一般来说，新鲜组织冷冻切片适合于大多数实验室的诊断需要。但是，由于新鲜组织有时容易引起某些易变化成分的扩散，这一情况在切片时比较明显。因为切片时摩擦组织产生热量，会引起组织的临时轻度融化。虽然这一情况对诊断影响不大，但是，有可能影响诸如酸性磷酸酶和碱性磷酸酶的活性。为了防止水解酶和其他一些组织抗原扩散，需要预先固定组织，使其能够局限[ 1 ]。
具体方法：固定新鲜组织于甲醛钙，4 ℃，18 h，流水冲洗，或蒸馏水短时过一下。若组织较少，容易破碎，如肠镜活检组织，吸水纸吸干。组织放入蔗糖胶液中4 ℃, 18 h。极小组织可以酌情缩短时间。固定组织块于组织托上方。蔗糖胶的配方：阿拉伯胶2 g，蔗糖60 g，蒸馏水200 ml，4 ℃保存。
参考 献：
[ 1 ] Bancroft J D. Theory and practice of histological techniques[M].London: Churchill Livingstone, 2008: 98 - 104.
[ 2 ] Carson F L.Histotechnology. A self-instructional text[M]. Chicago: American Society of Clinical Pathologists Press, 2009: 64 - 5.
[ 3 ] Prophet E B. Armed forces institute of pathology. Laboratory methods in histotechnology[M]. Washington DC: ARP, 1992: 67 - 70.
[ 4 ] 王伯沄，李玉松，黄高昇等. 病理学技术[M]. 北京:人民卫生出版社, 2000: 88 - 9.
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