顶空气相分析法就是将溶液中某些气体通过震荡或加热的办法释放出来,然后用气相色谱进行分析的方法。氢气的溶解度非常小,在溶液中非常容易挥发,日本学者利用氢气的这个特征,将组织破碎液体中的氢气释放到顶空瓶内,然后进行分析。顶空的本质是一种萃取,是将气体从液体萃取到气体状态,这样因为液体中成分复杂,水的质量相对气体比较高,导致分离和分析困难。采用这种方法,只需要分辨率比较小的气体检测设备,就可以分析多种生物活性气体水平。气体在组织和血液中虽然溶解的质量比较小,但体积比并不小。例如氢气体积溶解度可达到2%,质量比只有百万分之二,因此只要将氢气从溶液中释放出来,2%这种级别的浓度是非常容易检测,甚至再稀释100倍,仍然能进行准确分析。
药物研究最关注的二个问题,一是安全性,二是有效性。和安全性密切相关的问题是体内药物的动态代谢变化,或者说药物代谢动力学。例如在进行药物一期临床研究中,确定药物对正常健康人的安全性,就会同时估计药物的最大安全用量,最好能进行细致的药物代谢动力学分析,在二期临床研究中依然是重要研究目的。三期临床研究重点才是药物的有效性。从药物临床研究的程序上可以看出,药物安全性第一,有效性第二。
关于药物研究安全性,药物代谢动力学分析是很重要的问题,对于气体生物学效应,气体在体内的代谢规律有其特殊性,但也是学术上非常关心的问题。
氢气生物学研究现在已经成为生物医学领域的重点领域,大量基础和临床研究都证明氢气对许多疾病居于潜在的应用前景。但关于氢气的体内动力学数据相对比较少,根本原因是气体的特殊性质,氢气非常容易从体内释放出来,浓度变化波动大,分析技术相对复杂,而且大多数存在不稳定性的问题,导致这方面的研究成为氢气生物学研究的短板。
研究中使用的超高浓度氢气水制备和呼吸氢气的装置
氢气浓度的检测是从事氢气生物学效应研究的基础,浓度检测包括气体成分分析、溶液氢气浓度检测和血液组织内氢气浓度分析。
一般来说,不同氢气浓度范围对检测方法有不同要求。如果氢气浓度达到百分比以上水平,可用经典简易的燃烧反应法分析,浓度更高时可用热传导检测方法进行分析。溶液中氢气浓度一般比较低,只能达到个位数百万比浓度,这种浓度可以先顶空法将液体中氢气挥发出,采用气相或专用气体分析方法检测。难度最大的是生物样品中氢气浓度的检测,理论上采用氢电极分析是可行的,但由于存在各种生物电信号干扰,一般不容易获得非常准确的数据,这甚至已经成为制约氢气在体分析的瓶颈。
对于人体来说,比较理想的方法时是收集呼吸气体中分析氢气的浓度,如果浓度更低,可通过富集氢气的手段进行分析。但是这只属于整体代谢动力学研究,对于具体目标组织如血液、皮肤和各种器官中氢气浓度的动态分析,仍然比较困难甚至是无法实现的。血液中的氢气浓度检测可以通过挥发结合富集的方法用气相色谱法进行分析。
日本学者在SCIENTIFIC REPORTS发表的论 ,采用他们建立的分析技术,对饮用氢水、静脉和腹腔注射氢气生理盐水和呼吸氢气等各种常见给氢气的方法血液和许多重要器官中氢气的浓度进行了全面分析,获得了重要的动力学数据,给氢气生物学研究提供了重要参考,也建立了一种比较可行的组织氢气浓度的检测方法。这种研究方法也可以用于其他类型的生物气体研究。
虽然研究论 中提出检测氢气的关键是如何保持气体不泄漏和制备过程很关键,但并没有给出详细的实验方法,不过这似乎并不难解决,也许因为太简单没有必要描述。另外,他们没有研究比较详细的时间变化规律,呼吸氢气也只有4%以下3个浓度,从氢气摄取效率上考虑,呼吸更高浓度的氢气尽管有一定风险,但肯定是提高体内氢气浓度的更有效手段。也有采用肠道细菌产生氢气的方法没有进行研究,这方面也是值得关注和深入探讨的。
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